Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Кое-какие возбудители инфекционных болезней со временем открытия антибиотиков мало поменяли темперамент первоначальной чувствительности к этим препаратам (стрептококки группы А, пневмококки, менингококки, бруцеллы, кое-какие сальмонеллы).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

К тому же, большая часть патогенных микробов со временем купило устойчивость к обширно, подчас неконтролируемо и необоснованно используемым противомикробным средствам. Громаднейшее значение неприятность устойчивости микроорганизмов имеет в отношении стафилококков, шигелл, эшерихий, протея, среди которых антибиотикоустойчивые штаммы выделяются с громаднейшей частотой.

По степени чувствительности к основным антибиотикам микробы подразделяются на чувствительные, умеренно чувствительные и устойчивые. В группу чувствительных входит большая часть штаммов микроорганизмов, рост которых на питательных средах заканчивается при применении концентраций, соответствующих средним терапевтическим дозам антибиотиков. Если он угнетается при применении лишь больших доз препаратов, то такие микробы умеренно чувствительны к антибиотику. В случае если подавление роста достигается в опыте в лаборатории только при высоких концентрациях препарата, каковые нельзя создать в организме, то такие возбудители инфекции относятся к устойчивым к антибиотику.

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существует ряд способов: способ последовательных разведений в жидкой питательной среде либо питательном агаре, способ диффузии в агар (способ дисков, насыщенных антибиотиками) и ускоренные способы. Способ дисков несложен, обширно употребляется, но дает только качественный ответ. Более надежным и правильным количественным способом есть способ последовательных разведений антибиотиков в питательной среде в стандартных условиях опыта. Как правило корреляция данных лабораторных изучений с клиническими не редкость достаточно полной, а терапия — действенной при изучении в динамике не только клинического течения процесса, но и вероятной смены возбудителя либо его чувствительности к антибиотикам.

Концентрация антибиотиков в тканях и жидкостях организма, как и их антимикробная активность, относятся к основным параметрам, определяющим эффективность антибиотикотерапии. При ее изучении наиболее обширно используют микробиологические способы изучения, основанные на способности антибиотика задерживать рост тест-микроба.

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) в большинстве случаев используют:

• Способ диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроорганизм, а после этого вносят антибиотики. В большинстве случаев препараты вносят либо в особые лунки в агаре, либо на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками (способ дисков). Учет результатов выполняют через дни по наличию либо отсутствию роста микробов около лунок (дисков).

• Способ дисков — качественный и разрешает оценить, чувствителен либо устойчив микроорганизм к препарату.

• Способы определения минимальных ингибирующих и антибактериальных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который разрешает in vitro не допустить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественные способы, каковые разрешают вычислить дозу препарата, поскольку концентрация антибиотика в крови должна быть существенно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата нужно для действенного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.

Имеется ускоренные методы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам способом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар либо среду АГВ в чашке Петри.

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на однообразном расстоянии друг от друга бумажные диски, которые содержат определенные дозы различных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру территорий задержки роста исследуемой культуры бактерий делают выводы о ее чувствительности к антибиотикам.

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Для получения точных результатов нужно использовать стандартные диски и питательные среды, для контроля которых употребляются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Способ дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к не хорошо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (к примеру, полимиксин, ристомицин). В случае если эти антибиотики предполагается применять для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов способом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам способом серийных разведений. Данным способом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Сначала готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл либо ЕД/мл) в особом растворителе либо буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), по окончании чего к каждому разведению додают 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10 6 —10 7 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, по окончании чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой показывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам выполняют по особой готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров территорий задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, и значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при применении простых доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении больших доз препарата.Устойчивыми являются микробы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при применении максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости. После этого в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий применяют обычный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli. По окончании инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором благодаря расщепления глюкозы тест-бактериями. Концентрация антибиотика определяется умножением громаднейшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий. К примеру, в случае если большое разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равняется 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024х0,313=320 мкг/мл образовывает концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл дневной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. По окончании застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, по окончании чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу делают выводы по наличию роста стандартного штамма стафилококка около той либо другой исследуемой культуры (около диска).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Меню